Amostras foliares de Crotalaria paulinea apresentando mosaico foram coletadas em São Luiz, MA, e enviadas ao Laboratório de Virologia Vegetal da UFC. As amostras foram testadas por Elisa indireto, contra anti-soros para Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) e Cucumber mosaic virus (CMV) e por dupla difusão em àgar contra anti-soro para Cowpea severe mosaic virus (CPSMV). As amostras reagiram somente com o anti-soro para CPSMV, indicando ser C. paulinea mais um hospedeiro natural do vírus. Extratos das folhas de C. paulinea foram inoculados em plantas de caupi (Vigna unguiculata subsp. unguiculata) mantidas em casa de vegetação. Dez dias após a inoculação, as plantas passaram a exibir sintomas de mosaico e a presença do CPSMV foi confirmada por sorologia. Nos estudos de gama de hospedeiros, envolvendo oito espécies botânicas, o isolado de CPSMV obtido de C. paulinea (CPSMV-Cp) infetou sistemicamente somente cultivares de caupi. Estudos de reações de RT-PCR revelaram a presença de uma banda no gel de agarose de 594 pb para o CPSNV-Cp semelhante às de outros isolados de CPSMV. O CPSMV-Cp foi multiplicado em caupi cv. Pitiúba e purificado por clarificação com n-butanol, precipitação viral com PEG e ultracentrifugação. A preparação purificada apresentou um espectro de absorção ultravioleta típico de núcleoproteína com uma razão A260/A280 de 1,7. Coelho da raça Nova Zelândia Branca imunizado com a preparação viral purificada, produziu anti-soro policlonal reativo com CPSMV em dupla difusão em àgar. Este é o primeiro relato sobre a infecção natural de CPSMV em C. paulinea.

Leaf samples from Crotalaria paulinea showing mosaic were collected in the city of São Luiz, MA and sent to the Plant Virus Laboratory at the UFC. The leaf samples were tested by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) against antisera specific to Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) and Cucumber mosaic virus (CMV) and by gel double-diffusion against antiserum to Cowpea severe mosaic virus (CPSMV). The samples reacted only with the antiserum to CPSMV indicating that C. paulinea is one more natural host of the virus. Leaf extracts from infected C. paulinea were mechanically inoculated in cowpea (Vigna unguiculata subsp. unguiculata) plants maintained in greenhouse. Ten days after inoculation, the plants started to exhibit mosaic and the presence of CPSMV was confirmed by serology. In a host range study involving eight plant species, the CPSMV isolate obtained from C. paulinea (CPSMV-Cp) infected only cowpea cultivars. The results of RT-PCR revealed a band in the agarose gel of 594 pb for CPSMV-Cp similar to those of other CPSMV isolates. The CPSMV-Cp was increased in cowpea cv. Pitiuba and purified by clarification using n-butanol, virus particle precipitation with polyethylene glycol (PEG) and ultra centrifugation. The purified virus preparation presented an ultraviolet light absorption spectrum typical of nucleoprotein, with a ratio A260/A280 equal to 1.7. A White New Zealand rabbit immunized with the purified virus preparation produced polyclonal antiserum reactive to CPSMV in agar double-diffusion. This is the first report about natural infection of C. paulinea by CPSMV.

No período de maio de 2003 a março de 2004, foram coletadas amostras foliares de plantas de melancia (Citrullus lanatus) de 21 campos de cultivo de cucurbitáceas, no Estado de Roraima. As amostras exibiam diferentes sintomas de vírus e foram levadas para o Laboratório de Virologia Vegetal da Universidade Federal do Ceará para serem testadas por "enzyme linked immunosorbent assay" (Elisa)-indireto, contra anti-soros específicos para Cucumber mosaic virus (CMV), Papaya ringspot virus estirpe melancia (PRSV-W), Watermelon mosaic virus (WMV) e Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV). Nos testes de Elisa, utilizou-se o conjugado universal, anti-imunoglobulina (IgG) de coelho produzida em cabra conjugada à enzima fosfatase alcalina. Todas as amostras foram testadas, também, por dupla difusão contra o anti-soro para Squash mosaic virus (SqMV). Os resultados indicaram a presença do PRSV-W em 84,2% das amostras coletadas em maio de 2003, em 7,1% das amostras coletadas em dezembro de 2003 e em 55,6% das amostras coletadas em março de 2004. A presença do ZYMV foi observada em 10,5% das amostras coletadas em maio de 2003, 21,4% das amostras coletadas em dezembro de 2003 e em 25,9% das amostras de março de 2004. O WMV foi detectado somente em oito das amostras coletadas em março de 2004 (29,6%). Os resultados desta pesquisa confirmam a ampla dispersão do PRSV-W em cultivos de cucurbitáceas no território brasileiro e a preocupante expansão do ZYMV em razão dos elevados prejuízos que o mesmo tem causado em outras partes do mundo.

Leaf samples were collected from watermelon plants (Citrullus lanatus) from 21 different fields in the state of Roraima from May/2003 to March/2004. The samples were sent to the Plant Virus Laboratory of the Federal University of Ceará, to be tested by indirect enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) against antisera specific to Cucumber mosaic virus (CMV), Papaya ringspot virus strain watermelon (PRSV-W), Watermelon mosaic virus (WMV) and Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV). The Elisa tests were processed using the universal conjugate, anti-imunoglobulim (IgG) from rabbit produced in goat, conjugated to alkaline phosphatase. All samples were also tested by double immunodifusion against antiserum specific to Squash mosaic virus (SqMV). The presence of PRSV-W was detected in 84.2% of the samples collected in May/2003, in 7.1% of the samples collected in December/2003 and 55,6% in March/2004. The presence of ZYMV was detected in 10.5% of the samples collected in May, in 21.4% in December/2003 and in 25.9% in March/2004. The WMV was detected only in eight of the samples collected in March/2004 (29.6%). These results confirm the world widespread dispersion of PRSV-W in cultivated cucurbit fields in Brazil and rise a concern about the ZYMV expansion, which has caused serious yield lost in other parts of the world.

Em razão da freqüente ocorrência de infecção mista, na natureza, o presente trabalho objetivou estudar o efeito da interação de diferentes espécies de potyvírus em meloeiro (Cucumis melo), melancia (Citrullus lanatus) e abobrinha (Cucurbita pepo). Foram usados os seguintes vírus da família Potyviridae, gênero Potyvirus: Papaya ringspot virus (PRSV); Watermelon mosaic virus, (WMV) e Zucchini yellow mosaic virus, (ZYMV). Os efeitos na sintomatologia das infecções duplas e simples de PRSV, WMV e ZYMV foram avaliados em três híbridos de meloeiro, duas variedades de melancia e abobrinha 'Caserta', em experimentos de casa de vegetação. Os três vírus, isoladamente ou em todas as duplas combinações possíveis, foram inoculados, em plantas dos híbridos de meloeiro Hy Mark, Gold Mine e Orange Flesh, variedades de melancia Crimson Sweet e Charleston Gray e abobrinha 'Caserta', usando-se dez plantas de cada híbrido ou variedade, por combinação de vírus. As inoculações foram efetuadas por meio de extratos de folhas com infecção simples dos respectivos vírus. As plantas inoculadas com cada vírus isoladamente e suas respectivas combinações foram observadas quanto ao aparecimento de sintomas durante 30 dias após as inoculações. Amostras foliares das plantas inoculadas foram, também, testadas por ELISA indireto contra os anti-soros correspondentes para cada vírus. As infecções duplas em meloeiro, melancia e abobrinha revelaram, através da avaliação sintomatológica, que existem interações sinérgicas entre PRSV, WMV e ZYMV. As infecções duplas envolvendo o ZYMV apresentaram alta severidade, exibindo sintomas não encontrados em infecções simples, apesar da severidade nas infecções isoladas do ZYMV.

Considering the frequent natural occurrence of mixed infection of two or more viruses in the same plant, the present research was developed with the objective of studying the symptomatological effects of mixed virus infections in melon (Cucumis melo), watermelon (Citrullus lanatus) and zucchini (Cucurbita pepo). The following virus species from the family Potyviridae genus Potyvirus were used in the study: Papaya ringspot virus (PRSV), Watermelon mosaic virus (WMV), and Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV). The symptomatological effects were evaluated in double and single infections in three melon hybrids Hy Mark, Gold Mine and Orange Flesh, two watermelon varieties Crimson Sweet and Charleston Gray and zucchini 'Caserta'. In greenhouse experiments, PRSV, WMV and ZYMV alone and in all possible double combinations were inoculated in ten-day-old melon, watermelon and zucchini plants, using ten plants of each hybrid or variety per virus combination. Inoculations were performed using leaf extracts from plants infected with each virus. Leaf samples from each virus combination were tested by ELISA against antisera specific for the respective viruses. The symptomatological effects in double virus infections revealed the existence of synergistic interactions between PRSV, WMV and ZYMV in melon, watermelon and zucchini. The double infections involving ZYMV showed severe symptoms and symptoms not present in ZYMV single infection.

The Northeast of Brazil presents great potencial for melon (Cucumis melo) and watermelon (Citrullus lanatus) production. Melon fruit with white spots and watermelon fruits showing chlorotic spots were demonstrated to be caused by Watermelon mosaic virus-2, through indirect enzyme linked-immuno sorbent assay.

As técnicas sorológicas são de grande importância na identificação de vírus, sendo que sua maior limitação na diagnose de viroses vegetais reside na dificuldade da purificação dos vírus para a produção de anti-soros. No presente trabalho, coelhos da raça Nova Zelândia Branco foram, individualmente, imunizados por via oral com extrato de plantas de caupi (Vigna unguiculata) infetadas pelo vírus do mosaico severo do caupi (Cowpea severe mosaic virus, CpSMV) e extrato de folhas de mamoeiro (Carica papaya) infetado com o vírus do amarelo letal (Papaya lethal yellowing, PLYV). Os extratos foram preparados em solução salina 0,15 M, na proporção de 1:1 (p/v), clarificados a uma centrifugação de 10.000 g por 10 min e administrados oralmente aos coelhos em duas séries de cinco doses diárias de 1,0 ml cada, com intervalo de dois dias entre cada série. Os anti-soros obtidos foram avaliados por difusão dupla em agar e ELISA indireto, tendo mostrado-se reativos com extratos de plantas infetadas, sem apresentar reação com extratos de plantas sadias. Embora com títulos baixos, os anti-soros apresentaram excelentes especificidades para extrato de plantas infetadas, criando perspectivas para produção de anti-soros contra vírus de plantas com boa imunogenicidade e de difícil purificação. Trata-se de uma técnica simples, rápida e barata para produção de anti-soro específico para vírus de plantas.

Serological techniques are of great importance for plant virus identification and characterization. The major limiting factor for using these techniques for plant virus identification is the requirement of a good virus purified preparation to be used in immunizing animals for antiserum production. In the present study, two New Zealand rabbits were orally immunized with extracts from cowpea (Vigna unguiculata) plants systemically infected with Cowpea severe mosaic virus (CPSMV) and with extracts from papaya (Carica papaya) infected with Papaya lethal yellowing virus (PLYV). The leaf extracts were prepared in saline solution 0.15 M in the rate of 1:1 (w/v) and clarified by a centrifugation of 10,000 g for 10 min. The clarified extracts containing the viruses were orally administered to the New Zealand rabbits in two series of five daily doses of 1.0 ml each. The obtained policlonal antisera were shown to be very specific to their respective viruses in double immunodiffusion and indirect ELISA. These seem to be the first antisera specific for plant virus obtained by rabbit oral immunization. The results open up some possibilities for producing antisera to plant viruses of difficult purification. It is a simple, fast and inexpensive method for production of antisera for plant viruses when compared to the traditional techniques that involve rabbit injections with purified virus preparations.

Os vírus representam sérios obstáculos para o sucesso da olericultura no mundo inteiro, constituindo a identificação daqueles de maior incidência numa região, papel fundamental para o estabelecimento de estratégias de controle. Visitas de campo foram realizadas a plantios de espécies de cucurbitáceas em áreas produtoras do Maranhão e amostras foliares foram coletadas de 118 plantas com sintomas ou suspeita de sintomas de vírus, sendo 46 de abóbora (Cucurbita moschata), 30 de melancia (Citrullus lanatus), 23 de maxixe (Cucumis anguria), 13 de pepino (C. sativus) e seis de melão (C. melo). Todas as amostras foram testadas contra anti-soros específicos para os principais vírus das famílias Bromoviridae, Comoviridae e Potyviridae que infetam cucurbitáceas no Nordeste, mediante "enzyme-linked immunosorbent assay" (ELISA) indireto e dupla difusão em agar. Os resultados revelaram a identificação sorológica de Papaya ringspot vírus (PRSV) em 64,4% das amostras analisadas, seguido de Watermelon mosaic virus-2 (WMV-2) em 15,2%, Cucumber mosaic virus (CMV) em 6,8%, Squash mosaic virus (SqMV) em 3,4% e Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) em 3,4%. Este levantamento confirma a predominância do PRSV em espécies de cucurbitáceas cultivadas no estado do Maranhão.

Viruses represent serious obstacles for the success of producing vegetables, consisting the correct identification of those that infect cucurbits in a region, a fundamental point for establishing strategies for their control. Surveys were carried out at cucurbit fields in producing areas of the State of Maranhão. Leaf samples were collected from 118 plants showing virus like symptoms, 46 from squash (Cucurbita moschata); 30 from watermelon (Citrullus lanatus); 23 from Cucumis anguria; 13 from cucumber (C. sativus) and six from melon (C. melo). All samples were tested against antisera specific to the main virus species from the families Bromoviridae, Comoviridae and Potyviridae that infect cucurbits in Northeastern Brazil by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and double immunodiffusion technique. The results revealed that Papaya ringspot virus was serologically detected in 64.4% of samples analyzed, followed by Watermelon mosaic virus-2 in 15.2%, Cucumber mosaic virus in 6.8%, Squash mosaic virus in 3.4% and Zucchini yellow mosaic virus in 3.4%. This survey confirmed the prevalence of PRSV in cucurbit species grown in the State of Maranhão.